Plásmido Doble Nickase (m2) TNF-R1: sc-423442-NIC-2
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m2)TNF-R1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TNF-R1 (m2) y el plásmido de doble nickasa TNF-R1 (m22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Tnfrsf1a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TNF-R1 Anticuerpo (H-5): sc-8436
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m2) TNF-R1 | sc-423442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino Tnfrsf1a codifica el receptor 1 del factor de necrosis tumoral (TNF‑R1), un receptor de TNF expresado de manera ubicua que se une al TNF e inicia la transducción de señales que controlan la inflamación, la supervivencia celular y la muerte celular programada. Tras la unión del ligando, TNF‑R1 ensambla complejos de señalización en la membrana y en el citosol que regulan la activación de NF‑κB y MAPK, así como la apoptosis dependiente de caspasas y la necroptosis mediada por RIPK, conectando señales de la inmunidad innata con vías transcripcionales y de muerte celular. La desregulación de la señalización de TNF‑R1 se asocia con la fisiopatología inflamatoria y autoinmune, procesos neuroinflamatorios y respuestas a lesión tisular, lo que convierte a Tnfrsf1a en un nodo clave para estudiar la homeostasis impulsada por citocinas. La edición génica de Tnfrsf1a en modelos murinos permite la investigación mecanística de las redes de señalización de TNF, la función de los dominios del receptor y las contribuciones específicas de cada tipo celular a fenotipos de enfermedad mediados por el sistema inmunitario.
TNF-R1 El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tnfrsf1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tnfrsf1a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tnfrsf1a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tnfrsf1a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.