TMEM45A Lentiviral Activation Particles (h): sc-412437-LAC

TMEM45A kodiert das Transmembranprotein 45A, ein nur unzureichend charakterisiertes, multipassiges Membranprotein, das in hypoxischen und keratinisierenden Epithelien angereichert ist und mit der zellulären Anpassung an Sauerstoffmangelstress in Verbindung steht. Berichtete Funktionen verknüpfen TMEM45A mit Membrantransport und der Organisation des sekretorischen Weges, mit nachgeschalteten Effekten auf epitheliale Differenzierungsprogramme und stressresponsive transkriptionelle Netzwerke. Eine veränderte TMEM45A-Expression wurde in Tumormodellen mit Änderungen des Zellüberlebens und invasiver Phänotypen assoziiert, was seine Relevanz für hypoxiegetriebene Signalwege und epitheliale Plastizität unterstreicht. Diese Eigenschaften machen TMEM45A zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Stressantworten des Mikromilieus, der Biologie von Barrieregeweben und genregulatorischen Mechanismen in menschlichen Zellen.

TMEM45A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TMEM45A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TMEM45A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TMEM45A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TMEM45A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TMEM45A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.