TMEM205 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408587-ACT

TMEM205 kodiert ein vorhergesagtes Multi-Pass-Transmembranprotein, das in zellulären Membranen lokalisiert ist und vermutlich Membranverkehr sowie transportbezogene Prozesse beeinflusst, die die Homöostase intrazellulärer Kompartimente mitgestalten. Die Expression von TMEM205 wurde mit veränderten zellulären Stressantworten und Phänotypen des Wirkstofftransports in Verbindung gebracht, was auf eine Rolle in Signalwegen hindeutet, die die Exposition von Zellen gegenüber Xenobiotika modulieren. In der Krebsbiologie wird TMEM205 häufig im Zusammenhang mit dem Ansprechen auf Chemotherapie untersucht, insbesondere in Kontexten, in denen Membrandynamik und vesikuläre Verarbeitung die Wirkstoffakkumulation beeinflussen. Diese Eigenschaften machen TMEM205 zu einem nützlichen Ziel, um zu untersuchen, wie membranassoziierte Proteine die zelluläre Anpassung an Umwelt- und pharmakologische Stressoren steuern.

TMEM205 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TMEM205-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TMEM205 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TMEM205-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TMEM205-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TMEM205-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TMEM205-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TMEM205-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TMEM205-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TMEM205-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.