Plasmide CRISPR d'Activation (h) TM4SF1: sc-404779-ACT

TM4SF1 (transmembrane 4 L six family member 1) est une glycoprotéine de surface cellulaire de type tétraspanine, enrichie dans les contextes endothéliaux et épithéliaux, et impliquée dans la régulation de l’adhésion cellulaire, de la motilité et du remodelage du cytosquelette. Elle organise des microdomaines membranaires et module les signaux émis par les intégrines et les récepteurs à activité tyrosine kinase, influençant des voies liées à la migration, aux interactions avec la matrice extracellulaire et aux programmes angiogéniques. L’expression de TM4SF1 a été associée à des phénotypes invasifs et au remodelage vasculaire dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les changements de comportement cellulaire induits par le microenvironnement. En tant que protéine d’échafaudage membranaire, TM4SF1 est fréquemment étudiée pour sa contribution à la communication cellule–cellule et cellule–matrice, ainsi qu’aux réponses transcriptionnelles en aval.

TM4SF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TM4SF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TM4SF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TM4SF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TM4SF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TM4SF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TM4SF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TM4SF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TM4SF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TM4SF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.