TLE3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423414

Übersicht

Tle3 kodiert den transkriptionellen Korepressor TLE3, ein Mitglied der Groucho/TLE-Familie, das die Genexpression moduliert, indem es mit sequenzspezifischen Transkriptionsfaktoren zusammenwirkt und chromatinregulierende Komplexe rekrutiert. TLE3 ist an Entwicklungs- und linienbestimmenden Programmen beteiligt und spielt eine wichtige Rolle in Wnt/β-Catenin- und Notch-assoziierten Transkriptionsnetzwerken, in denen es Zellschicksalsentscheidungen und Differenzierungsverläufe beeinflussen kann. In Mausmodellen wurde TLE3 mit der Biologie von Adipozyten und der Regulation metabolischer Gene in Verbindung gebracht sowie mit einer breiteren Kontrolle von Proliferation und Differenzierung durch kontextabhängige Repression. Fehlregulierte, mit TLE3 verknüpfte Transkriptionsprogramme werden häufig in Krebs- und Modellen für Entwicklungsstörungen untersucht, um zu verstehen, wie eine veränderte Korepressor-Funktion Signalausgänge umgestaltet.

Das TLE3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tle3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tle3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tle3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TLE3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tle3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TLE3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tle3-Exone abzielen, die für die TLE3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tle3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TLE3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TLE3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tle3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TLE3 HDR-Plasmid (m) und TLE3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tle3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tle3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.