Plasmide CRISPR d'Activation (h) TIMP-2: sc-400685-ACT

Le gène humain **TIMP2** code l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéinases‑2 (**TIMP‑2**), un régulateur sécrété du renouvellement de la matrice extracellulaire (MEC) qui module l’activité des métalloprotéinases matricielles, notamment en inhibant **MMP2**, et façonne le remodelage dépendant des protéases. En équilibrant la dégradation de la matrice induite par les métalloprotéinases et son inhibition, TIMP‑2 influence la migration et l’adhérence cellulaires ainsi que l’architecture tissulaire, le reliant à des voies qui gouvernent l’invasion, l’angiogenèse et la réparation des plaies. TIMP‑2 participe également au contrôle de la protéolyse péricellulaire via des interactions avec des facteurs associés à la membrane tels que **MT1‑MMP**, influençant ainsi les signaux dans le microenvironnement tumoral et le remodelage fibrotique. Une expression dérégulée de **TIMP2** a été associée à des altérations de la dynamique de la MEC observées dans la biologie des cancers, les états inflammatoires et les maladies du tissu conjonctif, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour des études mécanistiques des phénotypes dépendants de la matrice.

TIMP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TIMP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIMP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TIMP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TIMP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIMP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TIMP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIMP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIMP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TIMP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.