Tim13A/B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408855

Übersicht

TIMM13 kodiert das kleine Tim13A/B‑Chaperon im mitochondrialen Intermembranraum, das mit TIMM8A/TIMM8B zusammenwirkt, um hydrophobe Vorläuferproteine vom TOM‑Komplex zur Einbaumaschinerie der inneren Membran zu geleiten. Dieser Transportweg unterstützt die oxidative Phosphorylierung, indem er die korrekte Biogenese von Carrier‑Proteinen der inneren Membran und anderen Multipass‑Proteinen fördert, und verknüpft die Funktion von TIMM13 mit dem mitochondrialen Proteinimport, der Aufrechterhaltung des Membranpotenzials und der Proteostase. Störungen in Netzwerken kleiner Tim‑Chaperone können zu mitochondrialer Dysfunktion, verstärkten zellulären Stressantworten und einem beeinträchtigten Energiestoffwechsel beitragen – Prozesse, die häufig in Studien zu Neurodegeneration und Tumormetabolismus untersucht werden. TIMM13 ist daher relevant für die Forschung zur mitochondrialen Qualitätskontrolle, zur Homöostase der Atmungskette und zu stressadaptiven Signalwegen.

Das Tim13A/B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TIMM13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TIMM13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TIMM13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tim13A/B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TIMM13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tim13A/B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TIMM13-Exone abzielen, die für die Tim13A/B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TIMM13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Tim13A/B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Tim13A/B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TIMM13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tim13A/B HDR-Plasmid (h) und Tim13A/B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TIMM13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TIMM13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.