Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
TIGAR Double Nickase Plasmid (h): sc-401390-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TIGAR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TIGAR Double-Nickase-Plasmid (h) und TIGAR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TIGAR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TIGAR: sc-166290
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TIGAR Double Nickase Plasmid (h) | sc-401390-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TIGAR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401390-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Human TIGAR (TP53-induzierter Regulator von Glykolyse und Apoptose) kodiert ein fruktose-2,6-bisphosphataseähnliches Protein, das den zellulären Stoffwechsel umprogrammiert, indem es Fruktose-2,6-bisphosphat senkt, den glykolytischen Fluss dämpft und die Aktivität des Pentosephosphatwegs begünstigt. Über eine gesteigerte NADPH-Produktion unterstützt TIGAR die Redoxhomöostase und begrenzt reaktive Sauerstoffspezies (ROS), wodurch es die metabolische Kontrolle mit Stressantworten sowie Apoptose- und Autophagieprogrammen nachgeschaltet an die p53-Signalkaskade verknüpft. TIGAR wurde im Kontext metabolischer Reprogrammierung und der Anpassung an oxidativen Stress untersucht, was für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen relevant ist, bei denen Redoxgleichgewicht und Bioenergetik das Zellschicksal beeinflussen. Als zentraler Regulator an der Schnittstelle von p53-Signalisierung, Glykolyse und antioxidativen Abwehrmechanismen bietet TIGAR ein gut zugängliches Ziel, um stoffwechselabhängige Phänotypen in menschlichen Zellen zu analysieren.
TIGAR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TIGAR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TIGAR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TIGAR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TIGAR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.