Plasmide CRISPR d'Activation (h) TID-1_L/S: sc-404796-ACT

DNAJA3 code la co‑chaperonne mitochondriale DnaJ/Hsp40 TID‑1, exprimée sous des isoformes longue et courte (TID‑1L/S) qui coordonnent le repliement des protéines dépendant de Hsp70, leur import et le contrôle qualité au sein de la mitochondrie. En régulant la protéostase et les réponses au stress mitochondrial, TID‑1L/S influence la fonction de la chaîne respiratoire, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et la dynamique mitochondriale, qui façonnent la survie cellulaire et la signalisation métabolique. DNAJA3 a été associé à des voies contrôlant l’apoptose et l’adaptation cellulaire au stress, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le dysfonctionnement mitochondrial en biologie du cancer et dans des phénotypes liés à la neurodégénérescence. Une perturbation de l’activité de TID‑1L/S peut modifier l’homéostasie mitochondriale et des programmes de signalisation en aval pertinents pour le stress protéotoxique et le métabolisme énergétique.

TID-1L/S Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DNAJA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TID-1L/S Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DNAJA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DNAJA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TID-1L/S. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DNAJA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TID-1L/S au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TID-1L/S dans les cellules tumorales présentant une expression de DNAJA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.