Plasmide CRISPR d'Activation (h) TIA-1: sc-400212-ACT

TIA1 code TIA‑1, une protéine liant l’ARN qui reconnaît des séquences riches en uridines (U) et coordonne la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique via l’épissage alternatif, la stabilisation des ARNm et la répression de la traduction. TIA‑1 est un composant clé des granules de stress et relie les réponses cellulaires au stress à des modifications du devenir des transcrits, influençant des processus tels que l’apoptose, la signalisation de l’immunité innée et l’expression de gènes inflammatoires. Par ses rôles dans le métabolisme de l’ARN et les programmes d’adaptation au stress, une activité altérée de TIA‑1 a été associée à une dérégulation des voies des cytokines et à un traitement aberrant des ARN, observés dans des contextes de recherche sur le cancer et les maladies neurodégénératives. Ces fonctions font de TIA1 un nœud utile pour étudier comment la signalisation du stress remodèle les réseaux d’expression génique au niveau de l’ARN.

TIA-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TIA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIA-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TIA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TIA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIA-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TIA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIA-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIA-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TIA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.