THADA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405868

Descripción general

THADA (asociado a adenoma tiroideo) codifica una gran proteína citoplasmática implicada en la homeostasis energética celular y en procesos adaptativos frente al estrés, con vínculos descritos con la función del retículo endoplásmico y el manejo del calcio. Estudios genéticos asocian THADA con la susceptibilidad a neoplasias tiroideas y con rasgos relacionados con el sistema endocrino, y la actividad alterada de THADA se ha conectado con fenotipos metabólicos en distintas poblaciones. En modelos celulares, la perturbación de THADA se utiliza para investigar vías que acoplan la detección de nutrientes, la fisiología de los orgánulos y el control del crecimiento celular. Estas características hacen de THADA una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización asociada al metabolismo y de la biología tumoral dependiente del contexto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO THADA (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen THADA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del THADA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de THADA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína THADA.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en THADA para la investigación de la señalización de THADA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de THADA críticos para la función de THADA
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de THADA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido THADA CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido THADA CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus THADA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR THADA (h) y el plásmido HDR THADA (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología THADA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana THADA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.