Plasmide CRISPR d'Activation (h) TGFβ2: sc-400496-ACT

TGFB2 code le transforming growth factor bêta 2 (TGFβ2), une cytokine sécrétée qui transmet des signaux via les récepteurs TGF-β de type I/II à activité sérine/thréonine kinase, afin d’activer la transcription dépendante des SMAD ainsi que des voies non canoniques, notamment MAPK, PI3K/AKT et les GTPases de la famille Rho. TGFβ2 régule le dépôt de la matrice extracellulaire, la transition épithélio-mésenchymateuse, les décisions de destinée cellulaire, la modulation immunitaire et la morphogenèse tissulaire, contribuant à l’homéostasie et à la réparation des plaies. Une dérégulation de la signalisation de TGFB2 a été impliquée dans la fibrose et un remodelage stromal aberrant, ainsi que dans des rôles dépendants du contexte au cours de la progression tumorale, de l’invasion et de l’échappement immunitaire. Ces fonctions font de TGFB2 un nœud clé pour analyser la signalisation du microenvironnement, les programmes de différenciation et les interactions entre voies de signalisation dans des modèles cellulaires humains.

TGFβ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGFB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGFβ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGFB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGFB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGFβ2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGFB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGFβ2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGFβ2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGFB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.