Particules Lentivirales d'Activation (m) TGase1: sc-423374-LAC

Le gène murin **Tgm1** code la transglutaminase 1 (TGase1), une enzyme dépendante du Ca²⁺ qui catalyse des liaisons croisées ε-(γ‑glutamyl)lysine entre des protéines structurales afin d’assembler l’enveloppe cornée insoluble. Cette activité est au cœur de la différenciation terminale des kératinocytes et de la formation de la barrière épidermique, en s’intégrant aux processus de kératinisation et de maturation de la couche cornée. La fonction de TGase1 recoupe la signalisation calcique et les programmes de différenciation qui coordonnent le remodelage du cytosquelette et la stabilisation de la matrice extracellulaire à la périphérie cellulaire. La perturbation de l’expression ou de l’activité de **Tgm1** est largement utilisée pour modéliser des défauts de barrière et des phénotypes cutanés inflammatoires, soutenant des études mécanistiques en biologie de l’épiderme et sur des voies pertinentes pour les maladies dermatologiques.

Les particules d'activation lentivirales TGase1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Tgm1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TGase1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Tgm1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TGase1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Tgm1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.