Plásmido Doble Nickase (h) TET1: sc-400845-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TET1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TET1 (h) y el plásmido de doble nickasa TET1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TET1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TET1 Anticuerpo (4F4): sc-293186
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TET1 | sc-400845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TET1 | sc-400845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TET1 codifica una dioxigenasa de metilcitosina que cataliza la oxidación gradual de la 5‑metilcitosina a 5‑hidroximetilcitosina y a derivados posteriormente oxidados, lo que favorece la desmetilación activa y pasiva del ADN. Mediante la modulación de los paisajes de metilación en CpG, TET1 contribuye a la regulación transcripcional, a la actividad de potenciadores (enhancers) y a las transiciones del estado de la cromatina que determinan decisiones de destino celular y programas de desarrollo. TET1 se integra en redes epigenéticas reguladoras que involucran metiltransferasas de ADN, componentes de la reparación por escisión de bases y modificadores de la cromatina, para mantener la plasticidad epigenómica a escala genómica. La alteración de la actividad de TET1 o de la distribución de 5hmC se asocia con una expresión génica desregulada observada en la biología del cáncer, procesos del neurodesarrollo y la diferenciación de células inmunitarias, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de inestabilidad epigenética.
TET1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TET1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TET1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TET1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TET1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.