Plásmido CRISPR de Activación (h) TET1: sc-400845-ACT

La TET1 humana (dioxigenasa 1 de metilcitosina ten-eleven translocation) es una dioxigenasa dependiente de Fe(II)/2-oxoglutarato que cataliza la oxidación de la 5-metilcitosina a 5-hidroximetilcitosina y a derivados oxidados posteriores, iniciando la desmetilación activa del ADN. A través de esta actividad, TET1 modula la regulación epigenética de la transcripción, el estado de la cromatina y los programas génicos del desarrollo, influyendo en procesos como la especificación de linaje, la estabilidad del genoma y las respuestas al daño del ADN. La remodelación de los patrones de metilación del ADN dependiente de TET1 se integra con redes transcripcionales y modificadores de la cromatina para controlar la actividad de potenciadores (enhancers) y promotores. La expresión desregulada de TET1 o los paisajes alterados de 5hmC se han asociado con estados transcripcionales aberrantes en cáncer y con alteraciones epigenéticas relevantes para el neurodesarrollo y la regulación inmunitaria, lo que la convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por el epigenoma.

TET1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TET1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TET1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TET1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TET1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TET1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TET1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TET1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TET1 en células tumorales con expresión de TET1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.