TDO2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402482

Descripción general

TDO2 (triptófano 2,3-dioxigenasa) es una enzima dependiente de hemo que cataliza el primer paso, y el paso limitante de la velocidad, de la degradación del triptófano a través de la vía de la quinurenina, convirtiendo el L-triptófano en N-formilquinurenina. Al controlar la disponibilidad intracelular de triptófano y los metabolitos derivados de la quinurenina, TDO2 influye en la homeostasis metabólica celular y puede modular la señalización a través de rutas sensibles al agotamiento de aminoácidos y de programas transcripcionales impulsados por metabolitos, incluida la actividad del receptor de hidrocarburos de arilo (AHR). La expresión de TDO2 es más prominente en el hígado, pero también se estudia en contextos extrahepáticos donde la alteración del catabolismo del triptófano afecta al equilibrio redox, al flujo de precursores de NAD+ y al diálogo cruzado inmunometabólico. La desregulación de la actividad de la vía de la quinurenina en la que participa TDO2 se ha asociado con la inflamación y la remodelación metabólica relacionada con el cáncer, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos del microambiente tumoral y la inmunometabolismo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TDO2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TDO2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TDO2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TDO2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TDO2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TDO2 para la investigación de la señalización de TDO2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TDO2 críticos para la función de TDO2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TDO2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TDO2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TDO2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TDO2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TDO2 (h) y el plásmido HDR TDO2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TDO2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TDO2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.