TC-PTP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403071-ACT

Das humane PTPN2 kodiert die T‑Zell‑Protein‑Tyrosinphosphatase (TC‑PTP), eine nichtrezeptorische PTP, die Signalinermediäre dephosphoryliert, um Zytokin‑ und Wachstumsfaktorantworten zu begrenzen. TC‑PTP ist ein zentraler negativer Regulator der JAK/STAT‑Signalübertragung und moduliert die Phosphorylierung von Mitgliedern der STAT‑Familie sowie rezeptorassoziierten Kinasen, um Transkriptionsprogramme zu formen, die die Immunhomöostase, Proliferation und zelluläre Stressantworten steuern. Durch Crosstalk mit Signalwegen nachgeschaltet von Rezeptor‑Tyrosinkinasen und inflammatorischen Reizen trägt PTPN2 dazu bei, Schwellenwerte für Aktivierung und Feedback‑Inhibition zu kalibrieren. Genetische und funktionelle Studien bringen eine veränderte PTPN2‑Aktivität oder ‑Expression mit fehlregulierter inflammatorischer Signalgebung und einer erhöhten Anfälligkeit für immunvermittelte und metabolische Phänotypen in Verbindung, was seine breite Relevanz für die Erforschung von Krankheitsmechanismen unterstreicht.

TC-PTP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTPN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TC-PTP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTPN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTPN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TC-PTP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTPN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TC-PTP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TC-PTP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTPN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.