TAUT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402918

Descripción general

SLC6A6 codifica el transportador de taurina TAUT, un transportador de membrana dependiente de sodio y cloruro que mantiene los reservorios intracelulares de taurina necesarios para la homeostasis osmótica, el manejo del calcio y la citoprotección frente al estrés oxidativo y del retículo endoplásmico (RE). La captación de taurina mediada por TAUT sustenta la función mitocondrial, la estabilización de membranas y procesos de señalización que influyen en la supervivencia celular, la diferenciación y la regulación del volumen en tejidos excitables y no excitables. Las alteraciones en la actividad de SLC6A6 y en la disponibilidad de taurina se han vinculado con una mayor susceptibilidad al estrés celular y con disfunción en sistemas como la retina, el corazón, el riñón y el tejido nervioso, por lo que resulta relevante para estudios de neurobiología, regulación cardiometabólica y respuestas inflamatorias al estrés. Como parte de las redes de transporte de la familia “solute carrier”, TAUT se cruza con vías que gobiernan los gradientes iónicos, el equilibrio redox y programas génicos de adaptación al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TAUT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC6A6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC6A6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC6A6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TAUT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC6A6 para la investigación de la señalización de TAUT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC6A6 críticos para la función de TAUT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC6A6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TAUT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TAUT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC6A6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TAUT (h) y el plásmido HDR TAUT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC6A6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC6A6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.