Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tak1L: sc-406747-ACT

MAP3K7CL code Tak1L, une protéine apparentée aux MAP kinase kinase kinases, proche du module de signalisation TAK1/MAP3K7, qui assure le couplage entre des signaux en amont et des cascades de kinases en aval. Les protéines de cet axe sont fréquemment associées à la régulation des voies NF-κB et MAPK, modulant la signalisation inflammatoire, les réponses au stress et le contrôle, dépendant du contexte, des programmes transcriptionnels. Bien que MAP3K7CL soit moins bien caractérisé que TAK1 canonique, sa similarité avec les membres de la famille MAP3K en fait une cible pertinente pour étudier l’architecture des réseaux de kinases, la redondance des voies et les mécanismes de compensation de signalisation. La dérégulation des voies associées à TAK1 est impliquée dans des phénotypes immunitaires et inflammatoires ainsi que dans des états de signalisation liés au cancer, ce qui soutient des études exploratoires de la fonction de MAP3K7CL dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.

Tak1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP3K7CL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tak1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP3K7CL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP3K7CL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tak1L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP3K7CL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tak1L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tak1L dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP3K7CL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.