Plasmide CRISPR d'Activation (m) Tafazzin: sc-426211-ACT

Le gène murin **Taz** code la **tafazzine**, une transacylase associée à la membrane interne mitochondriale qui remodèle la **cardiolipine** et d’autres phospholipides afin d’établir une composition mature des chaînes acyles. Ce remodelage lipidique est essentiel à l’efficacité de la phosphorylation oxydative, à l’organisation des crêtes mitochondriales et à la régulation de la dynamique mitochondriale ainsi que de la mitophagie en situation de stress énergétique. Une activité de la tafazzine perturbée modifie l’homéostasie de la cardiolipine, entraînant une altération du fonctionnement de la chaîne de transport d’électrons et une sensibilité accrue au stress métabolique, faisant de **Taz** un nœud clé des voies de contrôle qualité mitochondriales. En recherche biomédicale, **Taz** est souvent étudié dans le contexte du métabolisme lipidique mitochondrial, de la bioénergétique et de la signalisation dépendante de la cardiolipine, en lien avec des phénotypes neuromusculaires et cardiaques.

Tafazzin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Taz sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tafazzin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Taz dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Taz, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tafazzin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Taz natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tafazzin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tafazzin dans les cellules tumorales présentant une expression de Taz silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.