TAB2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401596-ACT

La proteina umana TAB2 (TAK1-binding protein 2) funziona come adattatore che collega la segnalazione dipendente dalla poliubiquitina all’attivazione di MAP3K7/TAK1, integrando segnali provenienti dalle vie del recettore del TNF e dei recettori Toll/IL-1. Attraverso interazioni con intermedi ubiquitinati e con TAB1/TAB3, TAB2 promuove la segnalazione a valle di NF-κB e MAPK, modulando l’espressione genica infiammatoria, le risposte allo stress e le decisioni di sopravvivenza cellulare. L’attività di TAB2 contribuisce alla regolazione dell’attivazione dell’immunità innata e di programmi trascrizionali indotti dalle citochine. Una segnalazione associata a TAB2 deregolata è stata implicata in fenotipi infiammatori e in contesti di segnalazione correlati al cancro, in cui un’attivazione aberrante delle vie NF-κB/MAPK sostiene stati cellulari patogeni.

TAB2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TAB2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TAB2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TAB2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TAB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TAB2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TAB2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TAB2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TAB2 nelle cellule tumorali con espressione di TAB2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.