SYP/Synaptophysin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400487-ACT

SYP codifica a sinaptofisina, uma glicoproteína integral de membrana abundante nas vesículas sinápticas, que contribui para a biogênese e o tráfego de vesículas e para a liberação de neurotransmissores por meio de exocitose regulada. Ela participa de processos do ciclo de vesículas pré-sinápticas, incluindo endocitose, ancoragem (docking) e fusão de vesículas, e é comumente utilizada como marcador de densidade sináptica e de diferenciação neuronal. As vias associadas à sinaptofisina se intersectam com a transmissão sináptica dependente de cálcio e com o remodelamento de circuitos neuronais dependente da atividade. Alterações na expressão de SYP foram relatadas em distúrbios neurodegenerativos e do neurodesenvolvimento e são frequentemente avaliadas em estudos de neuropatologia como um indicativo da integridade sináptica.

SYP/Synaptophysin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SYP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SYP/Synaptophysin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SYP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SYP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SYP/Synaptophysin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SYP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SYP/Synaptophysin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SYP/Synaptophysin em células tumorais com expressão de SYP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.