Plasmide CRISPR d'Activation (h) syntenin-1: sc-416825-ACT

SDCBP code la synténine‑1, une protéine adaptatrice contenant des domaines PDZ, qui se lie aux syndécanes et à divers récepteurs membranaires afin d’organiser des complexes de signalisation à la membrane plasmique et dans les compartiments endosomaux. La synténine‑1 régule le trafic endocytaire, la biogenèse des exosomes et la dynamique du cytosquelette, influençant l’adhésion cellulaire, la migration et la communication intercellulaire. Via des interactions avec des voies telles que FAK/Src, PI3K–AKT et la signalisation associée aux intégrines, elle contribue à coordonner le recyclage des récepteurs et les réponses transcriptionnelles en aval. Des altérations de l’expression de SDCBP et une signalisation vésiculaire dépendante de la synténine‑1 ont été associées à la progression tumorale, à des phénotypes liés aux métastases et à la modulation du microenvironnement inflammatoire, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques de la biologie des maladies.

syntenin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SDCBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

syntenin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SDCBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SDCBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de syntenin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SDCBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de syntenin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie syntenin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SDCBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.