Syntaxin 3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403466-ACT

STX3 kodiert Syntaxin 3, ein an der Plasmamembran lokalisiertes t‑SNARE-Protein, das beim polarisierten Exozytoseprozess das Andocken von Vesikeln und die Membranfusion vermittelt. Syntaxin 3 wirkt zusammen mit Proteinen der SNAP‑Familie und VAMPs, um den apikalen Transport in Epithelzellen sowie die gezielte Lieferung von Fracht in Neuronen und Immunzellen zu regulieren, und beeinflusst dadurch das Recycling von Membranproteinen und die Sekretion. Über seine Funktion bei endosomaler Sortierung und exozytotischen Signalwegen trägt STX3 zur Aufrechterhaltung der Zellpolarität, der Organisation von Zellkontakten (Junctions) und der Barrierefunktion bei. Eine dysregulierte SNARE‑abhängige Trafficking‑Maschinerie unter Beteiligung von STX3 wird mit Störungen der epithelialen Polarität und der neuronalen Funktion in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von STX3 in Signalwegen unterstützt, die für zelluläre Organisation und krankheitsassoziierte Transportphänotypen relevant sind.

Syntaxin 3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STX3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Syntaxin 3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STX3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STX3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Syntaxin 3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STX3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Syntaxin 3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Syntaxin 3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STX3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.