Particules Lentivirales d'Activation (h) Syne-2: sc-403318-LAC

SYNE2 code pour Syne-2 (nesprine-2), une protéine géante à répétitions de spectrine du complexe LINC qui traverse la membrane nucléaire externe et couple le noyau au cytosquelette d’actine via des interactions du domaine KASH avec les protéines SUN. Cette liaison nucléo-cytosquelettique soutient le positionnement du noyau, la mécanotransduction et l’organisation du cytosquelette périnucléaire, avec des effets en aval sur la polarité cellulaire, la migration et la dynamique nucléaire associée au cycle cellulaire. Par son rôle dans le maintien de l’architecture de l’enveloppe nucléaire et la transmission des forces, Syne-2 influence l’organisation de la chromatine et les réponses transcriptionnelles aux signaux mécaniques. Une altération de la fonction ou de l’expression de SYNE2 a été associée à des phénotypes impliquant une instabilité de l’enveloppe nucléaire et est étudiée dans le contexte de la cardiomyopathie, de la biologie des maladies neuromusculaires et de l’invasivité des cellules cancéreuses.

Les particules d'activation lentivirales Syne-2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SYNE2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Syne-2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SYNE2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Syne-2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SYNE2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.