Plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin III (m): sc-423245

Présentation

Le gène murin **Syt3** code la **synaptotagmine III**, une protéine à domaine C2 ancrée à la membrane qui agit comme capteur de Ca2+, couplant l’entrée de calcium au trafic vésiculaire régulé et à la fusion membranaire. La synaptotagmine III contribue à l’exocytose des vésicules synaptiques et au recyclage endocytique, aidant à façonner la cinétique de libération des neurotransmetteurs et la plasticité synaptique à court terme. Par des interactions dépendantes du Ca2+ avec les phospholipides et la machinerie associée aux SNARE, elle influence des voies de trafic dépendantes de l’activité dans les neurones et d’autres types cellulaires sécrétoires. Une altération de la signalisation de la famille des synaptotagmines a été associée à des mécanismes pertinents pour des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ce qui fait de **Syt3** une cible pour l’étude du dysfonctionnement synaptique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin III (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Syt3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Syt3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Syt3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Synaptotagmin III.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Syt3 pour l'étude de la signalisation de Synaptotagmin III, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Syt3 essentiels à la fonction de Synaptotagmin III
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Syt3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Synaptotagmin III plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Synaptotagmin III plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Syt3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Synaptotagmin III plasmide HDR (m) et le Synaptotagmin III (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Syt3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Syt3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.