Syk Double Nickaseプラスミド (h): sc-400189-NIC

SYKは、造血系細胞において免疫受容体シグナルを下流のエフェクター経路へと連結する、細胞質性の非受容体型チロシンキナーゼSykをコードする。B細胞受容体やFc受容体などのITAM含有受容体が刺激されると、Sykはアダプタータンパク質や酵素をリン酸化し、PLCγ、PI3K–AKT、MAPK/ERK、NF-κBを介したシグナル伝達を増幅することで、カルシウムフラックス、転写プログラム、増殖、サイトカイン応答を制御する。免疫活性化にとどまらず、SykはFc受容体（FcR）依存性の貪食、インフラマソーム関連のシグナル伝達状況、ならびにインテグリン連関経路を介した細胞骨格リモデリングにも関与する。SYKシグナルの破綻は、異常なB細胞活性化や炎症性回路に関与するとされ、免疫シグナルネットワークや血液疾患の機序研究でしばしば注目される。

Syk ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SYK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SYK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SYKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SYKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。