Partículas Lentivirales de Activación (h) STK33: sc-404127-LAC

STK33 codifica una proteína quinasa de serina/treonina implicada en la regulación de redes de señalización intracelular que coordinan la progresión del ciclo celular, la dinámica del citoesqueleto y las respuestas al estrés celular. Como quinasa, STK33 puede modular vías dependientes de la fosforilación que influyen en programas transcripcionales y en la estabilidad de las proteínas, conectando señales aguas arriba con cambios aguas abajo en la proliferación y la supervivencia. Las alteraciones en la expresión o la actividad de STK33 se han investigado en el contexto de dependencias de señalización oncogénica y del control anómalo del crecimiento en múltiples modelos tumorales. Estas características hacen de STK33 una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización regulada por quinasas, la interacción entre vías y las vulnerabilidades dependientes del genotipo en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral STK33 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de STK33 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral STK33 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción STK33, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de STK33. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo STK33 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.