Plasmide CRISPR d'Activation (h) STK33: sc-404127-ACT

STK33 (kinase 33 de la sérine/thréonine) est une protéine kinase humaine impliquée dans la régulation de réseaux de signalisation intracellulaire qui influencent la survie cellulaire, la prolifération et l’organisation du cytosquelette. En tant que kinase putative de la sérine/thréonine, STK33 a été étudiée dans le contexte des dépendances à la signalisation oncogénique et des voies de réponse au stress, où une activité kinase altérée peut remodeler les programmes de phosphorylation en aval. Une expression ou une fonction dérégulée de STK33 a été associée à des phénotypes pertinents pour le cancer dans des systèmes modèles, notamment des modifications du contrôle de la croissance et de la sensibilité à l’apoptose. Ces propriétés font de STK33 une cible utile pour étudier le remodelage des voies piloté par les kinases et la fonction génique dépendante du contexte en recherche biomédicale.

STK33 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STK33 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

STK33 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STK33 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STK33, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de STK33. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STK33 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de STK33 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie STK33 dans les cellules tumorales présentant une expression de STK33 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.