Plásmido Doble Nickase (h) Stim2: sc-403491-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Stim2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Stim2 (h) y el plásmido de doble nickasa Stim2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a STIM2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Stim2 | sc-403491-NIC | 20 µg | $410.00 |
STIM2 (molécula 2 de interacción estromal) codifica un sensor de Ca²⁺ del retículo endoplásmico que acopla el estado de las reservas de Ca²⁺ del RE a la entrada de Ca²⁺ a través de la membrana plasmática mediante la activación de la entrada de calcio operada por depósitos (SOCE) a través de canales ORAI. Al modular la señalización basal y sostenida de Ca²⁺, STIM2 influye en vías posteriores que incluyen programas transcripcionales de calcineurina–NFAT, señalización MAPK y la regulación dependiente de Ca²⁺ de la secreción y la función mitocondrial. La actividad de STIM2 es relevante para procesos celulares como la señalización sináptica, la activación de células inmunitarias y las respuestas al estrés vinculadas a la homeostasis del RE. La desregulación de la SOCE y la expresión o función alteradas de STIM2 se han asociado con fenotipos neurodegenerativos, señalización inflamatoria y la reprogramación de la señalización de calcio relacionada con el cáncer, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos.
Stim2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus STIM2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de STIM2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de STIM2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con STIM2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.