Plásmido CRISPR de Activación (m) Stim1: sc-423189-ACT

Stim1 de ratón (molécula 1 de interacción estromal) es un sensor de Ca²⁺ del retículo endoplásmico que acopla el agotamiento de los depósitos de Ca²⁺ del RE con la entrada de calcio operada por depósitos (SOCE) mediante la activación de canales ORAI en las uniones entre el RE y la membrana plasmática. Este eje de señalización sostiene un influjo citosólico de Ca²⁺ prolongado, necesario para programas de transcripción dependientes de calcio, la adaptación metabólica y la secreción regulada en muchos tipos celulares. La SOCE mediada por Stim1 se interseca con vías que controlan la activación de células inmunitarias, la función muscular y la excitabilidad neuronal a través de efectores downstream como la señalización calcineurina–NFAT y MAPK. La actividad desregulada de STIM1 y la homeostasis del Ca²⁺ se utilizan ampliamente como vínculos experimentales con fenotipos inflamatorios, miopatías y trastornos asociados a la neurofisiología en modelos murinos mecanísticos.

Stim1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Stim1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Stim1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Stim1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Stim1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Stim1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Stim1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Stim1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Stim1 en células tumorales con expresión de Stim1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.