Plasmide CRISPR d'Activation (h) Stat3: sc-400027-ACT

Le gène humain **STAT3** code Stat3, un facteur de transcription cytoplasmique latent qui s’active en aval des récepteurs de cytokines et de facteurs de croissance via la signalisation **JAK/STAT**. Après phosphorylation, Stat3 dimérise et se transloque dans le noyau pour réguler des programmes géniques contrôlant la prolifération, la survie, la différenciation, l’inflammation et la fonction des cellules immunitaires, avec un important dialogue croisé avec les voies **MAPK** et **PI3K–AKT**. L’activité de STAT3 façonne les réponses de phase aiguë et influence la transition épithélio-mésenchymateuse, la signalisation angiogénique et l’adaptation métabolique dans divers types cellulaires. Une signalisation STAT3 dérégulée est associée à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns et est fréquemment étudiée dans des contextes de reprogrammation transcriptionnelle oncogénique et de signalisation du microenvironnement tumoral.

Stat3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STAT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Stat3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STAT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STAT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Stat3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STAT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Stat3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Stat3 dans les cellules tumorales présentant une expression de STAT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.