Plásmido CRISPR de Activación (h) Stat1: sc-400086-ACT

El gen humano **STAT1** codifica Stat1, un factor de transcripción central en la señalización de interferón-α/β e interferón-γ que se activa mediante fosforilación mediada por JAK y actúa aguas abajo de los receptores de citocinas. Tras su activación, Stat1 dimeriza y se transloca al núcleo para regular genes estimulados por interferón que controlan la defensa antiviral, la presentación de antígenos, la apoptosis y la restricción del ciclo celular. STAT1 integra vías inmunitarias innatas y adaptativas, incluido el crosstalk con las redes de NF-κB e IRF, moldeando las respuestas inflamatorias y la vigilancia inmunitaria. La actividad desregulada de STAT1 se ha implicado en la susceptibilidad a infecciones, la inflamación crónica y contextos de evasión inmunitaria oncogénica, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para diseccionar la señalización inmunitaria y los programas transcripcionales.

Stat1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STAT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Stat1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STAT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STAT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Stat1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STAT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Stat1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Stat1 en células tumorales con expresión de STAT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.