SSH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-433087

Übersicht

Slingshot-Proteinphosphatase 1 (SSH1) ist eine Cofilin-Phosphatase, die den Umsatz von Aktinfilamenten reguliert, indem sie ADF/Cofilin dephosphoryliert und aktiviert und dadurch das Durchtrennen von F-Aktin sowie den Umbau des Zytoskeletts fördert. In Mauszellen integriert SSH1 Signale von GTPasen der Rho-Familie und Kinasen wie LIMK, um die Dynamik von Lamellipodien, Zellpolarität, Adhäsion und gerichtete Migration zu steuern. Diese aktinregulatorische Achse beeinflusst Endozytose, Neuritenauswachsen und Mechanotransduktion und verknüpft die SSH1-Aktivität mit Prozessen, die für Entwicklung, Immunzellmigration und Gewebeumbau relevant sind. Eine Dysregulation der Cofilin–LIMK–SSH-Signalgebung wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit verändertem invasivem Verhalten und Stressantworten in Verbindung gebracht, was Ssh1 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung des Signalwegs macht.

Das SSH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ssh1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ssh1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ssh1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SSH1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ssh1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SSH1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ssh1-Exone abzielen, die für die SSH1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ssh1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SSH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SSH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ssh1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SSH1 HDR-Plasmid (m) und SSH1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ssh1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ssh1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.