SRp30c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403790

Übersicht

SRSF9 kodiert den serin-/argininreichen Spleißfaktor SRp30c, ein RNA-bindendes Protein, das während der prä-mRNA-Prozessierung zur Auswahl von Spleißstellen und zur Definition von Exons beiträgt. Durch Interaktionen mit exonspezifischen Spleißverstärkern (exonic splicing enhancers) und anderen SR-Proteinen hilft SRp30c, alternative Spleißprogramme zu koordinieren, die das Spektrum der Transkript-Isoformen bestimmen, und koppelt damit die RNA-Prozessierung an die Transkription und das weitere Schicksal der mRNA. Diese Spleißentscheidungen können die Zellzykluskontrolle, Stressantworten und differenzierungsassoziierte Genexpressionsnetzwerke beeinflussen. Eine fehlregulierte SR-Protein-Aktivität und veränderte Spleißmuster sind breit mit Krebs- und neurodegenerativen Erkrankungen assoziiert, wodurch SRSF9 einen relevanten Ansatzpunkt für mechanistische Studien zu Spleiß-abhängigen Phänotypen darstellt.

Das SRp30c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SRSF9-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SRSF9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SRSF9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SRp30c-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SRSF9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SRp30c-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SRSF9-Exone abzielen, die für die SRp30c-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SRSF9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SRp30c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SRp30c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SRSF9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SRp30c HDR-Plasmid (h) und SRp30c HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SRSF9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SRSF9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.