Src CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400165-ACT

Das humane SRC-Gen kodiert Src, eine prototypische nichtrezeptorische Tyrosinkinase, die Signale von Rezeptor-Tyrosinkinasen, Integrinen und G‑Protein-gekoppelten Rezeptoren integriert, um Proliferation, Überleben, Adhäsion und Zytoskelett-Remodellierung zu koordinieren. Die Src-Aktivität wird über Signalwege wie die fokale Adhäsionssignalgebung, PI3K–AKT, RAS–MAPK und STAT weitergeleitet und moduliert so Zellmotilität und Transkriptionsprogramme. Eine dysregulierte SRC-Signalgebung ist in zahlreichen Krebsmodellen häufig mit invasivem Verhalten, veränderten Zell–Matrix-Interaktionen und einer aberranten Reaktionsfähigkeit auf Wachstumsfaktoren assoziiert. SRC trägt außerdem zur Signalgebung von Immunrezeptoren und zur Dynamik der endothelialen Barriere bei, was seine breite Relevanz für die Systembiologie und die Erforschung von Krankheitsmechanismen unterstreicht.

Src Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SRC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Src Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SRC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SRC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Src-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SRC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Src-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Src-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SRC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.