Plasmide CRISPR d'Activation (h) SR-7: sc-404174-ACT

HTR7 code le récepteur humain 7 de la 5‑hydroxytryptamine (SR‑7), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gαs afin d’augmenter l’AMPc intracellulaire et d’activer une signalisation dépendante de la PKA. SR‑7 module l’excitabilité neuronale et la plasticité synaptique et peut influencer des programmes transcriptionnels en aval via l’axe AMPc/CREB, ainsi que par des interactions croisées avec les voies ERK/MAPK. Au‑delà de ses fonctions dans les circuits du système nerveux central, la signalisation d’HTR7 a été associée à la régulation des rythmes circadiens, des comportements liés à l’humeur et des réponses neuro‑inflammatoires, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour la recherche en neuropsychiatrie et en neurobiologie. Des altérations de la signalisation des GPCR sérotoninergiques impliquant HTR7 ont également été étudiées dans des contextes liés au sommeil et à des phénotypes affectifs, ce qui le rend pertinent pour des études de voies axées sur la neurotransmission et l’homéostasie cellulaire.

SR-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HTR7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SR-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HTR7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HTR7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SR-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HTR7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SR-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SR-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de HTR7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.