Plasmide Double Nickase (h) Squalene epoxidase: sc-402870-NIC

SQLE code la squalène époxydase, une monooxygénase flavine‑dépendante qui catalyse l’époxydation du squalène en 2,3‑oxidosqualène, une étape précoce et déterminante pour la vitesse de la biosynthèse du cholestérol et des stérols. En tant qu’enzyme associée au réticulum endoplasmique, elle contribue à réguler l’homéostasie des stérols et s’intègre au flux de la voie du mévalonate, à la dynamique des gouttelettes lipidiques et au contrôle par rétroaction de la composition membranaire. Une perturbation de l’activité de SQLE peut remodeler les profils lipidiques cellulaires, avec des effets sur les plateformes de signalisation et l’adaptation métabolique en condition de stress. Une régulation altérée de la biosynthèse des stérols impliquant SQLE a été associée à des phénotypes liés à la dyslipidémie et à une reprogrammation métabolique observée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur le métabolisme lipidique.

Squalene epoxidase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SQLE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SQLE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SQLE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SQLE.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.