Plasmide CRISPR d'Activation (h) SPT16: sc-401268-ACT

Le gène humain **SUPT16H** code **SPT16**, une sous-unité centrale du complexe chaperon d’histones **FACT** (Facilitates Chromatin Transcription), qui réorganise les nucléosomes afin de favoriser l’élongation de l’ARN polymérase II. En coordonnant la dynamique **H2A–H2B** et l’accessibilité de la chromatine, **SPT16** contribue à réguler les programmes transcriptionnels, le remodelage de la chromatine associé à la réplication et les réponses aux dommages de l’ADN. Le contrôle de la chromatine dépendant de FACT relie **SUPT16H** à des réseaux de signalisation proliférative et à des voies de stabilité du génome, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la régulation épigénétique et des mécanismes impliqués dans la transcription oncogénique et l’adaptation au stress. Une activité altérée de FACT a été associée à une expression génique dérégulée et à des états de chromatine perturbés observés dans de multiples contextes liés au cancer, ce qui appuie son utilisation comme nœud fonctionnel en recherche sur la chromatine et la transcription.

SPT16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SUPT16H sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SPT16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SUPT16H dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SUPT16H, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SPT16. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SUPT16H natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SPT16 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SPT16 dans les cellules tumorales présentant une expression de SUPT16H silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.