SPPL2b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405646

Übersicht

SPPL2B kodiert SPPL2b, eine intramembranäre Aspartylprotease aus der Familie der Signalpeptidpeptidase-ähnlichen Proteasen, die an endosomalen und lysosomalen Membranen lokalisiert ist. SPPL2b trägt zur regulierten intramembranären Proteolyse bei und beeinflusst dadurch den Umsatz von Membranproteinen sowie die Entstehung von Peptidfragmenten innerhalb des endo-lysosomalen Systems. Über diese Aktivitäten kann SPPL2b vesikulären Transport, die Prozessierung von Rezeptoren und nachgeschaltete Signalwege mit Bezug zu Immun- und Entzündungsprozessen beeinflussen. Eine fehlregulierte intramembranäre Proteolyse und eine gestörte endolysosomale Funktion sind relevant für Untersuchungen zu Neurodegeneration, der Homöostase von Immunzellen und der Qualitätskontrolle von Membranproteinen.

Das SPPL2b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPPL2B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPPL2B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPPL2B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPPL2b-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPPL2B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPPL2b-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPPL2B-Exone abzielen, die für die SPPL2b-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPPL2B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPPL2b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPPL2b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPPL2B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPPL2b HDR-Plasmid (h) und SPPL2b HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPPL2B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPPL2B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.