SPNS2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-432145-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SPNS2 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SPNS2ダブルニカースプラスミド（m）およびSPNS2ダブルニカースプラスミド（m2）は、Spns2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SPNS2 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-432145-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SPNS2 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-432145-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Spns2はSPNS2をコードしており、SPNS2はスフィンゴシン-1-リン酸（S1P）を細胞外へ輸送して、S1P受容体シグナル伝達に不可欠な細胞外濃度勾配を形成する多回膜貫通型の膜輸送体である。マウス組織では、SPNS2依存的なS1Pの分布がリンパ球トラフィッキング、血管成熟、ならびに内皮バリア機能を調節し、脂質代謝を免疫および血管新生関連経路と統合している。SPNS2の破綻は、炎症、血管透過性、臓器特異的な免疫監視に影響するS1P媒介性シグナルネットワークを攪乱する。これらの機能により、Spns2は実験モデルにおいて脂質メディエーター輸送、受容体駆動性シグナル伝達カスケード、ならびに免疫調節異常や血管病態生物学の基盤機構を研究するための有用な標的となる。
SPNS2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Spns2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Spns2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Spns2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Spns2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。