Spastin Lentiviral Activation Particles (m): sc-424512-LAC

Das Mausgen **Spast** kodiert **Spastin**, eine mikrotubuli-severierende AAA+-ATPase, die das Zytoskelett umgestaltet, indem sie Tubulin-Untereinheiten aus polymeren Gittern extrahiert. Spastin reguliert den axonalen Transport, das Neuritenauswachsen, den endosomalen Transport und die Zytokinese durch die dynamische Kontrolle der Mikrotubuli-Stabilität sowie durch Interaktionen mit ESCRT-assoziiertem Membran-Remodeling. Eine gestörte Spastin-Funktion beeinträchtigt die neuronale Mikrotubuli-Organisation und die Verteilung von Organellen, wodurch **Spast** ein zentraler Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen mit Relevanz für Axonerhalt und Neurodegeneration ist. In Mausmodellen wird eine veränderte Spast-Aktivität häufig genutzt, um Signalwege zu untersuchen, die das zytoskelettale Remodeling mit synaptischer Funktion und der Vulnerabilität von Motoneuronen verknüpfen.

Spastin Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Spast-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Spastin Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Spast-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Spastin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Spast-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.