Plasmide CRISPR/Cas9 KO SPARC (m): sc-423101

Présentation

Le gène murin *Sparc* code SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine), une glycoprotéine matricellulaire qui module l’organisation de la matrice extracellulaire, le dépôt de collagène et les interactions cellule–matrice. SPARC influence la signalisation des intégrines, la dynamique des adhésions focales et la disponibilité des facteurs de croissance, façonnant des processus tels que l’adhérence, la migration, la prolifération et le remodelage tissulaire. Une expression altérée de SPARC est associée à la fibrose et à un remodelage stromal aberrant, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes de réparation des plaies, de biologie vasculaire et de régulation du microenvironnement tumoral. Dans les systèmes immunitaire et musculosquelettique, les signaux matriciels dépendants de SPARC peuvent influencer l’inflammation, l’ostéogenèse et les propriétés mécaniques des tissus conjonctifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SPARC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sparc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sparc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sparc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SPARC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sparc pour l'étude de la signalisation de SPARC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sparc essentiels à la fonction de SPARC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sparc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SPARC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SPARC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sparc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SPARC plasmide HDR (m) et le SPARC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sparc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sparc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.