Plasmide CRISPR/Cas9 KO SP140 (h): sc-409816

Présentation

SP140 code une protéine nucléaire associée à la chromatine, exprimée principalement dans les lignées hématopoïétiques et immunitaires, où elle contribue à la régulation transcriptionnelle et au contrôle de l’état cellulaire. En tant que membre de la famille SP100/SP140 contenant des modules de type SAND, PHD et bromodomaine, SP140 est associée à la reconnaissance de caractéristiques de la chromatine et à l’assemblage de complexes régulateurs qui ajustent les programmes d’inflammation et de différenciation. Elle a été impliquée dans des voies de signalisation de l’immunité innée et adaptative, notamment via la modulation des réponses transcriptionnelles induites par les cytokines et des états d’activation des macrophages. Des études génétiques et fonctionnelles relient une activité altérée de SP140 à des troubles à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les mécanismes de régulation des gènes immunitaires et de contrôle épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SP140 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SP140 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SP140, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SP140 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SP140.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SP140 pour l'étude de la signalisation de SP140, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SP140 essentiels à la fonction de SP140
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SP140 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SP140 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SP140 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SP140. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SP140 plasmide HDR (h) et le SP140 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SP140 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SP140 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.