SOSTDC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403398-ACT

Das menschliche SOSTDC1 kodiert für Sclerostin-Domänen-enthaltendes Protein 1, einen sezernierten Antagonisten der BMP- und Wnt-Signalwege, der durch Modulation von Rezeptor-Liganden-Interaktionen die Signalwegaktivität begrenzt. Durch die Abschwächung der BMP-getriebenen SMAD-Signalübertragung und die Beeinflussung der β-Catenin-abhängigen Transkription trägt SOSTDC1 zur Regulation der Entwicklungsmusterung, der osteogenen Differenzierung und der Gewebehomöostase bei. Eine veränderte SOSTDC1-Expression wurde in mehreren Kontexten fehlregulierter Wachstumsfaktor-Signalgebung beschrieben, darunter Krebserkrankungen sowie fibrotische oder umbauassoziierte Zustände, in denen das BMP/Wnt-Gleichgewicht Proliferation, Differenzierung und Programme der extrazellulären Matrix beeinflusst. Als löslicher Signalwegregulator wird es häufig im Zusammenhang mit parakriner Signalgebung, epithelial-mesenchymalem Crosstalk und mikroenvironment-abhängigen Phänotypen untersucht.

SOSTDC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SOSTDC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SOSTDC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SOSTDC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SOSTDC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SOSTDC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SOSTDC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SOSTDC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SOSTDC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SOSTDC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.