Plásmido CRISPR de Activación (h) SNX3: sc-404028-ACT

SNX3 (sorting nexin 3) es un factor de tráfico endosomal que contiene un dominio PX, se une al fosfatidilinositol 3-fosfato y ayuda a organizar la dinámica de la membrana de los endosomas tempranos. Funciona junto con el complejo retromer para promover el reciclaje desde endosomas hacia la red trans-Golgi y para regular la clasificación de receptores y transportadores de la membrana plasmática, influyendo en la amplitud de la señalización y en la homeostasis de membranas. A través de sus funciones en la recuperación de carga y el reciclaje endocítico, SNX3 afecta vías relacionadas con la secreción de WNT y el tráfico de receptores, así como procesos más amplios vinculados a lisosomas y a la autofagia. La desregulación de la clasificación endosomal y del transporte asociado al retromer se ha implicado en neurodegeneración, biología del cáncer y fenotipos metabólicos, lo que convierte a SNX3 en un nodo útil para estudios mecanísticos de señalización dependiente del tráfico.

SNX3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SNX3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SNX3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SNX3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SNX3 en células tumorales con expresión de SNX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.