Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNX27: sc-403237-ACT

SNX27 (sorting nexin 27) est un adaptateur endosomal contenant un domaine PX, qui couple la reconnaissance des phosphoinositides membranaires au recyclage des cargos, principalement via l’interaction de son domaine PDZ avec des motifs de liaison PDZ présents sur des protéines transmembranaires. En s’associant aux complexes retromer et WASH, SNX27 contribue à coordonner le trafic des endosomes vers la membrane plasmique et la tubulation dépendante de l’actine, modulant ainsi la disponibilité des récepteurs et la signalisation en aval. Ces processus influencent l’homéostasie des récepteurs synaptiques, le recyclage des transporteurs de nutriments et le maintien de la polarité épithéliale, reliant SNX27 à des voies qui contrôlent l’amplitude de la signalisation cellulaire et la protéostasie membranaire. Des altérations de l’expression ou de la fonction de SNX27 ont été impliquées dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que dans une dérégulation du trafic des récepteurs observée dans plusieurs contextes cellulaires pertinents pour des maladies.

SNX27 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNX27 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNX27 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNX27 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNX27, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNX27. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNX27 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNX27 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNX27 dans les cellules tumorales présentant une expression de SNX27 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.