Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNAP 25: sc-401138-ACT

Le gène humain **SNAP25** code la protéine synaptosomale associée 25, une t‑SNARE essentielle qui s’assemble avec la syntaxine et VAMP/synaptobrévine pour assurer l’arrimage des vésicules synaptiques et la fusion membranaire déclenchée par le Ca²⁺. L’activité de SNAP25 est au cœur de l’exocytose régulée : elle module la probabilité de libération des neurotransmetteurs, la plasticité à court terme et le recyclage présynaptique des vésicules au sein de la voie de trafic vésiculaire médiée par les SNARE. En couplant la fusion vésiculaire à la signalisation calcique et à l’organisation du cytosquelette présynaptique, SNAP25 influence l’excitabilité des réseaux neuronaux et la maturation des circuits. Des altérations de l’expression ou de la fonction de SNAP25 ont été associées, dans des études génétiques et fonctionnelles, à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible utile pour explorer les mécanismes de dysfonction synaptique.

SNAP 25 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNAP25 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNAP 25 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNAP25 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNAP25, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNAP 25. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNAP25 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNAP 25 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNAP 25 dans les cellules tumorales présentant une expression de SNAP25 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.