SNAP 23 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417781-ACT

SNAP23 kodiert das synaptosomenassoziierte Protein 23, ein Qbc-SNARE, das mit Syntaxinen und Mitgliedern der VAMP-Familie zusammenwirkt, um Membranfusionsereignisse zu katalysieren, die für regulierte und konstitutive Exozytose erforderlich sind. SNAP23 unterstützt das Andocken und den Transport von Vesikeln an der Plasmamembran und beeinflusst dadurch Sekretion, endozytisches Recycling und die GLUT4-Translokation in insulinresponsiven Zellen. Durch die Kontrolle der Fusion von Granula und Vesikeln trägt es zur Degranulation von Immunzellen und zur Freisetzung von Zytokinen bei; eine Fehlregulation wurde mit veränderter inflammatorischer Signalübertragung sowie mit metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Diabetes- und Adipositasforschung relevant sind. SNAP23 ist zudem in Signalwege eingebunden, die die Membrandynamik und die Verfügbarkeit von Zelloberflächenrezeptoren steuern, und verknüpft so Vesikeltransport mit der Signalantwort in verschiedenen menschlichen Zelltypen.

SNAP 23 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNAP23-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNAP 23 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNAP23-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNAP23-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNAP 23-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNAP23-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNAP 23-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNAP 23-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNAP23-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.