SMEK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412572

Übersicht

PPP4R3A kodiert SMEK1, eine regulatorische Untereinheit der Proteinphosphatase 4 (PP4), die die Phosphataseaktivität auf bestimmte Substrate ausrichtet und dadurch phosphorylierungsabhängige Signalwege moduliert. SMEK1 wird mit der Kontrolle des Zellzyklusfortschritts, DNA-Schadensantworten und chromatinassoziierten Prozessen in Verbindung gebracht – vermittelt durch PP4-abhängige Dephosphorylierungsereignisse, die Checkpoint-Signale und die Dynamik nukleärer Proteine prägen. Durch die Beeinflussung des Gleichgewichts zwischen Kinasen und Phosphatasen kann SMEK1 Signalwege beeinflussen, die mit Genomstabilität, Proliferation und Stresssignalgebung verknüpft sind. Eine Fehlregulation regulatorischer PP4-Netzwerke, einschließlich PPP4R3A-assoziierter Funktionen, ist relevant für Studien zu onkogener Signalgebung, Replikationsstress und anderen Erkrankungen, bei denen abweichende Phosphorylierung und beeinträchtigte DNA-Reparatur zur Pathologie beitragen.

Das SMEK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PPP4R3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PPP4R3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PPP4R3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SMEK1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PPP4R3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SMEK1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PPP4R3A-Exone abzielen, die für die SMEK1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PPP4R3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SMEK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SMEK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PPP4R3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SMEK1 HDR-Plasmid (h) und SMEK1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PPP4R3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PPP4R3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.